【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：S216.4;Q93
【目录】：
- 摘要5-6
- Abstract6-12
- 第一章 引言12-21
- 1.1 研究背景12
- 1.2 研究目的和意义12-13
- 1.2.1 研究目的12-13
- 1.2.2 研究意义13
- 1.3 国内外研究进展13-21
- 第二章 产甲烷菌mcrA 基因的RFLP 分析21-32
- 2.1 实验材料21
- 2.1.1 主要试剂和仪器21
- 2.1.2 样品采集21
- 2.2 实验方法21-25
- 2.2.1 样品微生物总DNA 的提取21-22
- 2.2.2 mcrA 基因的PCR 扩增22
- 2.2.3 PCR 产物的回收和纯化22-23
- 2.2.4 mcrA 克隆文库的构建23-24
- 2.2.5 mcrA 基因的RFLP 分析24-25
- 2.2.6 测序及系统发育分析25
- 2.3 结果25-31
- 2.3.1 样品微生物总DNA 的提取25
- 2.3.2 PCR 扩增25
- 2.3.3 PCR 产物的回收和纯化25-27
- 2.3.4 克隆文库的构建及阳性克隆的筛选鉴定27-28
- 2.3.5 酶切分析28-29
- 2.3.6 测序及系统发育分析29-31
- 2.4 讨论31-32
- 第三章 沼气池中产甲烷菌的DGGE 分析32-40
- 3.1 实验材料32
- 3.1.1 主要试剂和仪器32
- 3.1.2 样品来源32
- 3.2 实验方法32-35
- 3.2.1 样品微生物总DNA 的提取32
- 3.2.2 16S rDNA 的PCR 扩增32-33
- 3.2.3 产甲烷菌 16S rDNA 的 DGGE 分析33-34
- 3.2.4 优势条带的回收及克隆文库的构建34-35
- 3.2.5 系统发育分析35
- 3.3 结果35-39
- 3.3.1 DNA 提取35-36
- 3.3.2 PCR 扩增反应36
- 3.3.3 回收和纯化36
- 3.3.4 DGGE 分析36-38
- 3.3.5 优势条带的回收及克隆文库的构建38
- 3.3.6 测序及系统发育分析38-39
- 3.4 讨论39-40
- 第四章 产甲烷菌mcrA 基因的荧光定量分析40-48
- 4.1 实验材料40
- 4.1.1 样品采集及样品总DNA 的提取40
- 4.1.2 主要试剂和仪器40
- 4.2 实验方法40-43
- 4.2.1 引物设计40-41
- 4.2.2 标准质粒的构建41-42
- 4.2.3 荧光定量PCR 反应条件的优化42
- 4.2.4 荧光定量PCR 扩增曲线的建立42-43
- 4.2.5 标准曲线的建立43
- 4.2.6 熔解曲线分析43
- 4.3 结果与讨论43-48
- 4.3.1 标准质粒的构建43-45
- 4.3.2 扩增曲线的建立45
- 4.3.3 标准曲线的建立45
- 4.3.4 熔解曲线分析45-48
- 第五章 全文结论、工作不足与展望48-50
- 5.1 全文结论48-49
- 5.1.1 沼气池微生物总DNA 的提取48
- 5.1.2 PstⅠ酶切分析48
- 5.1.3 群落多态性的DGGE 分析48
- 5.1.4 RFLP 与DGGE 的比较分析48
- 5.1.5 荧光定量分析48-49
- 5.2 不足与展望49-50
- 5.2.1 mcrA 基因RFLP 分析49
- 5.2.2 荧光定量不足与解决办法49-50
- 参考文献50-56
- 附录56-60
- 致谢60-61
- 作者简历61
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